腎病綜合征是由于腎小球基底膜通透性增高，導(dǎo)致血漿大量蛋白從尿中丟失而引起的一種臨床綜合征。近年來，腎病綜合征發(fā)病率呈現(xiàn)出快速上升趨勢(shì)。長(zhǎng)期大量蛋白尿，使機(jī)體內(nèi)蛋白大量丟失，血漿蛋白低下，血漿膠體滲透壓下降，進(jìn)而發(fā)生水腫及高脂血癥等改變，嚴(yán)重者可引起肺血栓栓塞等并發(fā)癥。

血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)有高度特異性。正常情況下，腎臟的VEGF主要在腎小球足細(xì)胞和遠(yuǎn)端腎小管及集合管等處有一定表達(dá)，能促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂，使腎小球的濾過及通透功能得以維持。

羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞有來源豐富、不受倫理學(xué)限制、低免疫原性、多向分化能力等優(yōu)勢(shì)。在特定環(huán)境中，羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞能夠被誘導(dǎo)分化為心肌細(xì)胞及神經(jīng)細(xì)胞等，在心肌梗死、 脊髓損傷等疾病治療過程中發(fā)揮了很好的作用，并且未觀察到明顯的排斥反應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn)，外源性間充質(zhì)干細(xì)胞能夠分化為腎小管上皮細(xì)胞而促進(jìn)腎功能的恢復(fù)。

背景：外源基因在間充質(zhì)干細(xì)胞中的表達(dá)有利于增強(qiáng)其移植效應(yīng)及提高其分化率。

目的：探討血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子基因修飾羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)腎病綜合征大鼠腎功能及凝血功能的改善作用。

方法：從72只雄性SD大鼠中隨機(jī)選出18只，作為正常組，未給予任何干預(yù)；余下的 54 只大鼠隨機(jī)分為模型組、羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞組、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子修飾組，每組 18 只，均于尾靜脈注射阿霉素建立腎病綜合征模型。造模后24h，經(jīng)尾靜脈注射生理鹽水、羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞懸液、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子基因修飾羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞懸液各10μL，1次/d，連續(xù)3d。移植后12周采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血脂水平、腎功能指標(biāo)及凝血指標(biāo)變化，采用三氯乙酸法測(cè)定24h尿蛋白含量，采用RT-PCR、Western blot檢測(cè)大鼠腎組織 HPA及VEGFmRNA和蛋白的表達(dá)。

主要觀察指標(biāo)：

① 各組大鼠的血脂水平、腎功能指標(biāo)及凝血指標(biāo)變化；

② 羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的存活和分布情況；

③ 大鼠腎組織HPA及VEGF的mRNA表達(dá)；

④ 大鼠腎組織HPA及VEGF的蛋白表達(dá)。

結(jié)果與結(jié)論：

①模型組24h尿蛋白定量及血清總膽固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白、肌酐、尿素氮水平與正常組比較均明顯升高(P< 0.05)，血清總蛋白、白蛋白、高密度脂蛋白水平則明顯降低(P< 0.01)。羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞組及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子修飾組上述各指標(biāo)均較模型組明顯改善(P < 0.05)。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子修飾組各項(xiàng)指標(biāo)優(yōu)于羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞組，差異有顯著性意義(P< 0.05)；見表1

②模型組各凝血指標(biāo)呈高凝趨勢(shì)，與模型組比較，羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞組、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子修飾組高凝狀況均有改善，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子修飾組更為明顯；見表2

③各組腎組織HPA及VEGFmRNA的表達(dá)與模型組相比，羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞組、VEGF修飾組及正常組HPAmRNA表達(dá)量均顯著減少，且正常組<VEGF修飾組<羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞組，各組間VEGFmRNA表達(dá)量比較發(fā)現(xiàn)，VEGF修飾組較其他3組均顯著升高(P<0.05)，與模型組相比，羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞組和正常組VEGF表達(dá)量亦升高(P < 0.05)，見圖4。

④各組腎組織HPA及VEGF的蛋白表達(dá)，模型組HPA的表達(dá)量較正常組、羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞組、VEGF修飾組升高(P<0.05)；羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞組及VEGF修飾組均較模型組降低，且VEGF修飾組降低更明顯(P<0.05)。各組間VEGF蛋白表達(dá)量比較發(fā)現(xiàn)，VEGF修飾組較其他3組均顯著升高(P<0.05)，與模型組相比，羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞組和正常組蛋白表達(dá)量亦升高(P<0.05)，見圖5。

研究發(fā)現(xiàn)，腎小球內(nèi)HPA基因的活性或表達(dá)增加，將使腎小球基膜上HS的分解增加，腎小球基膜電荷屏障被破壞。與模型組相比，羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞組、 VEGF修飾組HPAmRNA表達(dá)量均顯著減少，且正常組<VEGF修飾組<羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞組。

上述結(jié)果表明

應(yīng)用血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子修飾的羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療對(duì)腎病綜合征大鼠進(jìn)行干預(yù)能夠改善腎功能及血液的高凝狀態(tài)。